內(nèi)酰胺酶檢測的實驗原理：

　　酸測量法:青霉素被β-內(nèi)酶胺酶水解后成青霉素酸，pH值下降到6.8以下，用酚紅指示劑，由紅(紫)色 (原液:枸櫞酸緩沖液pH8.5) →黃色(pH6.8以下);淀粉-碘測定法:β內(nèi)酰胺酶破壞β內(nèi)酰胺環(huán)，碘與被打開β內(nèi)酰胺環(huán)結(jié)合，使藍色的淀粉-碘復(fù)合物轉(zhuǎn)變成無色。β-內(nèi)酰胺酶是多種不同類型以β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物為底物的降解酶，通過水解β-內(nèi)酰胺環(huán)造成β-內(nèi)酰胺類藥物失去活性，將待測菌與頭孢硝噻吩作用一定時間后，如待測菌產(chǎn)生青霉素酶，則可水解頭孢硝噻吩的β-內(nèi)酰胺環(huán)，顏色由黃色變?yōu)榧t色。

　　內(nèi)酰胺酶檢測的臨床意義：

　　1.細菌產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶可使易感抗生素水解而滅活。

　　2.對革蘭陰性菌產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定的廣譜青霉素和二、三代頭孢菌素，其耐藥機制不是由于抗生素被β-內(nèi)酰胺酶水解，而是由于抗生素與大量的β-內(nèi)酰胺酶結(jié)合，使其停留于胞膜外間隙中，不能進入靶位發(fā)生抗菌作用。

　　3.青霉素結(jié)合蛋白(PBPs)靶蛋白與抗生素親和力降低，PBPs增多或產(chǎn)生新的PBPs均可使抗菌藥物失去抗菌作用。

　　4.細菌的細胞壁或外膜的通透性改變，使抗生素不能或很少進入細菌體內(nèi)到達作用靶位，革蘭陰性菌的外膜是限制β-內(nèi)酰胺類抗生素透入菌體的一道屏障。銅綠假單胞菌對β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥性是由于外膜非特異性孔道蛋白缺陷所致的。